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法測定蛋白濃度試劑盒
更新時間:2013-08-14 點擊次數(shù):1073

一.微量法檢測:(利用酶標儀進行定量分析)

  1. 將標準品工作液按0,5,10,152025μl加入到96孔板的標準品孔中,不足25μl用水補足到25μl/孔。其它孔加入適當體積樣品,不足25μl加水補足到25μl。

  2. 根據(jù)樣品數(shù)量,按50體積試劑A加1體積試劑B(50:1)充分混勻,配置成適量Lowry工作液。Lowry試劑工作液室溫2小時內穩(wěn)定。

  3. 各孔加入Lowry試劑工作液125μl,振蕩混勻,室溫放置10分鐘。

  4. 向各孔加入試劑C12.5μl,立即混勻,室溫放置30分鐘。

  5. 測定A500nm、A590nm、A650nmA750nm500-750nm之間的波長都可以接受。

  6. 根據(jù)標準曲線計算出樣品的蛋白濃度。

 常規(guī)法檢測:

  1. 取7支試管,在前6管分別加入標準蛋白質250μg/ml溶液0、0.2、0.40.6、0.8、1ml,第7管加入1ml待測樣品液,用雙蒸水分別將每管的體積補充到1ml。

  2. 向每管加入Lowry試劑工作液5ml混合,室溫下放置10分鐘后。

  3. 向每管加入試劑C  0.5ml,每加一管立即混勻,室溫放置30分鐘。

  4. 用分光光度計在波長650nm處,以第1管(不含蛋白質)對照調零,分別測定每管的光密度值。

  5. 以每管的光密度值為縱坐標,每管的蛋白質量為橫坐標作圖,然后根據(jù)待測樣品管的光密度值在坐標上查得其蛋白質含量。

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